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粗蛋白的测定方法(2)

来源:互联网  更新时间:2016-07-18 20:55:56

粗蛋白的测定方法

试样选取和制备

选取具有代表性的试样用四分法缩减至200克,粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止试样成分的变化。

粗蛋白的测定方法

粗蛋白测定步骤

1、试样消煮:称取试样0.5~1克(含氮量5~80毫克)准确至0.0002克,放入凯氏烧瓶中,加入6.4克混合催化剂,与试样混合均匀,再加入12毫升硫酸和2粒玻璃珠,将凯氏烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力(360~410℃)直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2小时。

2、氨的蒸馏:将试样消煮液冷却,加入20毫升蒸馏水,转入100毫升容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20毫升硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10~20毫升注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10毫升氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气。蒸馏4分钟降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1分钟,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。

3、蒸馏检验:精确称取0.2克硫酸铵,代替试样,按5.1.2步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

4、滴定检测:用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L(4.6.2)盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

粗蛋白的测定方法

蔗糖的空白测定

称取蔗糖0.5克,代替试样,按第5章进行空白测定,消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2毫升。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3毫升。

粗蛋白的测定方法

粗蛋白测定分析

1、计算见下式:粗蛋白质(%)=(V2-V1)·c×0.0140×6.25/(m×V'/V)×100。V2:滴定试样时所需标准酸溶液体积(毫升),V1:滴定空白时所需标准酸溶液体积,毫升,c:盐酸标准溶液浓度,mol/L,m:试样质量(克),V:试样分解液总体积,毫升,V:试样分解液蒸馏用体积,毫升,0.0140:与1.00毫升盐酸标准溶液〔c(HCl)=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量,6.25:氮换算成蛋白质的平均系数。

2、重复性:每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25%以上时,允许相对偏差为1%。当粗蛋白含量在10%~25%之间时,允许相对偏差为2%。当粗蛋白质含量在10%以下时,允许相对偏差为3%。

部分专业知识转自网络

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